Святой Тимофей появился на свет в начале I века в Листрах, городе, расположенном в римской провинции Анатолия, которая соответствует современной Турции.

Апостол Тимофей был епископом Эфесским и жил в I веке (+80). Во время миссионерского путешествия апостола Павла, когда он проповедовал Евангелие в Листрах и произвел чудо исцеления у человека, страдавшего с рождения, многие жители Листр уверовали в истинного Бога. Одна иудейка пригласила апостола в свой дом и поручила ему своего сына Тимофея, умоляя взять его под свою опеку. С этого момента Тимофей стал преданным спутником и соратником Павла, а также любимым учеником. Вместе они несли трудности, подвергались преследованиям, посещали города Греции и Малой Азии, где проповедовали с искренним рвением. Когда апостола заключили в темницу в Риме и предстояло его казнить, именно Тимофея он призвал на последнюю встречу перед смертью.

В Новозаветных книгах сохранились два послания Павла к Тимофею, наполненные словами любви и мудрыми наставлениями. В одном из них Павел писал: "Ты последовал мне в учении, жизни, привязанности, вере, любви, терпении. Терпи трудности, как добрый воин Иисуса Христа". Также имя Тимофея упоминается в начале нескольких других посланий Павла, что указывает на то, что Тимофей, вероятно, записывал их под диктовку своего учителя.

Позднее апостол Павел поставил Тимофея первым епископом в древнем городе Эфесе. В этом городе, около 80 года (по некоторым источникам 97 год), Тимофей стал свидетелем мученичества, когда епископ, проповедуя Евангелие и противостоя воздвигнутому в честь богини Дианы шествию, был избит, тащен по улицам и забит до смерти.

В IV веке мощи святителя были перевезены в Константинопольскую церковь святых апостолов рядом с гробницами святого Андрея и святого Луки. В 1204 году они были перемещены крестоносцами в итальянский город Термоли, где до сих пор хранятся в соборе Божией Матери. Небольшие фрагменты мощей также находятся в Николаевском монастыре в Форт-Майерсе (Флорида, США) и Казанском соборе в Элисте (Россия).

День памяти апостола Тимофея в Православной Церкви отмечается 4 февраля.